Detección de toxinas A y B intracelulares en genotipos epidémicos de Clostridiodes difficile - Quesada Gómez, Carlos; Jiménez Badilla, Iveth (Hechos Microbiológicos, 2021)
Introducción: Clostridioides difficile es el principal causante de diarrea de origen nosocomial y asociada al uso de antibióticos a nivel mundial; sus principales factores de virulencia son las toxinas A y B (TcdA y TcdB). En los últimos años se ha dado el surgimiento de cepas con virulencia incrementada y responsables de brotes epidémicos caracterizadas dentro del genotipo NAP1/RT027. Estas cepas exhiben una mayor secreción de toxinas y presentan altos niveles de resistencia a fluoroquinolonas. El primer informe de brotes epidémicos por estas cepas en América Latina, fue hecho en Costa Rica, donde también se describió un genotipo autóctono clasificado como NAPCR1/RT019, que presentó una virulencia incrementada pero sin sobresecreción de toxinas. Métodos: se obtuvo lisados celulares de aislamientos clínicos de los genotipos NAP1/RT027, NAPCR1/RT019 y NAP4/ RT014 para la detección de TcdA y TcdB intracelular por medio de Western Blot. Además, se realizó un ensayo de citotoxicidad en cultivo celular para evaluar el nivel y la actividad biológica de la TcdB detectada en los lisados. Lo anterior en diferentes tiempos del crecimiento in vitro de las bacterias. Resultados: en los lisados celulares se detectó TcdA en todos los genotipos estudiados y TcdB solamente en NAP1/ RT027. La mayor señal detectada para ambas toxinas fue en la cepa NAP1/RT027 a las 24 y 48 horas de crecimiento. En cultivo celular predominó una mayor actividad citotóxica de TcdB producida por NAP1/RT027, seguida por el genotipo NAPCR1/RT019 y una actividad menor en NAP4/RT014. Conclusiones: La detección de una mayor cantidad y actividad de toxinas a nivel intracelular en la cepa epidémica NAP1/ RT027 se correlaciona con reportes anteriores sobre hiperproducción de toxinas por este genotipo. Se comprueba que una cepa con virulencia incrementada como NAPCR1/RT019 no sobreproduce toxinas, lo cual también concuerda con reportes de la detección de toxinas a nivel extracelular. Este estudio presenta información importante acerca de metodologías que permiten la detección de toxinas en lisados de C. difficile y contribuye a la discusión sobre las diferencias en la producción de toxinas según los genotipos de este patógeno.