Análisis del gen PRF1 revela una nueva mutación en un paciente con linfohistiocitosis hemofagocítica familiar de inicio tardío asociada al haplotipo R54C/A91V - Sánchez, Isaura Pilar; Sánchez, Isaura P.; Álvarez, Jesús A.; Pérez, Camilo A.; Erazo, Ruth; Orrego, Julio C.; Franco, Jose L.; Trujillo-Vargas, Claudia M. (Iatreia, 2013)
Las mutaciones en el gen PRF1 que codifica para la perforina son las responsables del desarrollo de Linfohisticitosis Hemofagocítica Familiar (LHF) Tipo II (OMIM #603553). Recientemente nuestro grupo reportó los primeros 4 casos de deficiencia de perforina en pacientes con diagnóstico de LHF en América Latina, demostrando el alelo R54C/A91V como un haplotipo común que confiere función citotóxica residual en las células NK de individuos afectados, asociado con un inicio tardío de la enfermedad. Este estudio reporta un nueva mutación (G47V) en el gen PRF1 en un paciente con LHF asociada al haplotipo R54C/A91V. Se incluyó una paciente de 4 años de edad, hija de padres no consanguíneos y sin historia familiar de LHF quien presentó un cuadro clínico de 5 meses de evolución de fiebre asociada a hepatoesplenomegalia, adenopatías abdominales, pancitopenia, hiporexia, somnolencia y convulsiones. Los análisis hematológicos evidenciaron la presencia de histiocitos en aspirado de médula ósea y granulomas no caesificantes en biopsia de hígado. Se observó pleocitosis (70 linfocitos/μl) e incremento de proteínas en examen de líquido cefalorraquídeo, así como niveles elevados de ferritina y transaminasas en sangre. La única enfermedad infecciosa comprobada fue una infección de tracto urinario por K. pneumoniae. Estos hallazgos clínicos fueron compatibles con los criterios diagnósticos de LHH. Evaluación de las subpoblaciones de linfocitos NK (LNK) y expresión de perforina intracelular se realizó en muestras de sangre periférica (SP). El ensayo de translocación de CD107a y la prueba de citotoxicidad con CFSE/IP en Células Mononucleares de SP estimuladas con IL-2 e IL-15 humana recombinante se determinó por citometría de flujo. El análisis genético se realizó a partir de DNA genómico por PCR y secuenciación del exón 2 del gen PRF1. La paciente mostró porcentajes y números absolutos de LNK normales en SP de acuerdo a los valores de referencia para la edad. Se observó una disminución severa en la expresión de perforina intracelular y una defectuosa función citotóxica de los LNK de la paciente en comparación a los resultados observados en el control sano. Sin embargo, la translocación de CD107a en los LNK de la paciente y el control sano fueron similares. El análisis genético reveló que la paciente fue un heterocigoto compuesto para la nueva mutación G47V y una mutación previamente reportada R54C en el gen PRF1. Adicionalmente, ella presentó la variante común A91V, la cual se ha reportado con un aleo de susceptibilidad a LHF. El análisis in silico de la mutación G47V mostró alteraciones en la estabilidad termodinámica de la perforina resultando en una defectuosa conformación funcional de la proteína. Estos hallazgos extienden el espectro de mutaciones en PRF1 en pacientes de Colombia y sugieren la necesidad de estudios moleculares para determinar la contribución real del alelo A91V a la patología asociada en FHL.