Subpoblaciones neuronales presentes en cultivos primarios de ganglio espinal y su relación con la infección in vitro por virus de rabia - Martínez, Marlén; Quiroga, Niyibi; Castellanos, Jaime E.; Hurtado, Hernán (Iatreia, 2000)
El virus de la rabia presenta un fuerte tropismo neuronal y que produce una encefalitis generalmente letal. En un accidente rábico clásico, producido por la mordedura de un animal infectado, el virus es captado por terminaciones nerviosas motoras, autonómicas o sensoriales. Si es captado por estas últimas, el virus se transporta retrógradamente hacia los somas neuronales ubicados en los ganglios espinales y de ahí pasa hasta el Sistema Nervioso Central en donde ejerce su acción patógena. Por este motivo los cultivos de ganglio espinal son un modelo relevante para estudiar la interacción entre el virus de la rabia y las neuronas sensoriales presentes en ellos. En estos cultivos se encuentran dos tipos de células, neuronas y células no neuronales (fibroblastos y células de Schwann). Al inocular los cultivos con virus de rabia cepa CVS (Challenge Virus Standard), a pesar de que las células no neuronales son la mayoría, las que se infectan en mayor proporción son las neuronas, lo que confirma el marcado neurotropismo del virus. Adicionalmente a esto, dentro de la población neuronal, parece existir una subpoblación con mayor susceptibilidad hacia la infección por el virus. Para comprobar esta hipótesis, se caracterizaron las subpoblaciones neuronales presentes en estos cultivos utilizando un criterio morfológico (diámetro neuronal) y uno bioquímico (presencia de neuropéptidos como marcadores de subpoblaciones en el ganglio). Se realizó una técnica de doble inmunocitoquímica para virus rábico y los neuropéptidos Sustancia P (SP), Neuropéptido Y (NPY), Galanina (GAL), Péptido Relacionado con el Gen de la Calcitonina (CGRP) y Péptido Intestinal Vasoactivo (VIP), que clásicamente se usan para la definición de subpoblaciones. El análisis morfométrico demostró que en nuestros cultivos el 85% de las neuronas presentes son de pequeño diámetro (<25mm) siendo sólo el 15% de gran tamaño (>25 mm). De igual manera se encontró que el virus infecta el 34% del total neuronal, distribuido este porcentaje en neuronas de todos los tamaños. Con el análisis inmunocitoquímico se encontró que el 46, 48, 23, 26 y 22% de las neuronas presentan inmunoreactividad para SP, NPY, GAL, CGRP y VIP, respectivamente. De igual manera, el análisis morfométrico demostró que aunque estos neuropéptidos están presentes en neuronas de todos los tamaños, mas del 95% de las neuronas marcadas para GAL y CGRP son neuronas pequeñas, mientras que la distribución de VIP, SP y NPY no presenta una preferencia por ningún tamaño neuronal en particular. Finalmente el análisis estadístico realizado sobre los ensayos de doble marcaje virus-neuropéptidos demostró que hay una asociación altamente significativa entre las neuronas infectadas que a su vez presentan marcaje para SP y NPY (P<0.001). Todo esto nos permite concluir que es posible caracterizar las subpoblaciones neuronales presentes en cultivos de primarios de ganglio espinal por criterios morfológicos y bioquímicos y que por lo menos dos de estas subpoblaciones presentan una mayor susceptibilidad a la infección in vitro por el virus de rabia. Este trabajo aporta la primera evidencia de susceptibilidad neuronal diferencial hacia la infección por virus de la rabia en un modelo in vitro.