Separación de conidias de Paracoccidioides brasiliensis por gradientes discontinuos de Percoll - Jiménez, María Del Pilar; Cano, Luz Elena; García, Luis Fernando; Restrepo, A. (Iatreia, 2000)
Se ha demostrado que las conidias de Paracoccidioides brasiliensis (Pb) constituyen una de las formas naturales infectantes del hongo. Sin embargo, debido a la dificultad para obtener conidias, los estudios experimentales in vitro e in vivo han utilizado principalmente inóculos de levaduras. El presente trabajo tuvo como objetivo implementar un método para purificar conidias a partir de cultivos del hongo en su fase miceliar, hechos en medios pobres (agar-agua) que permiten la esporulación. Para la purificación se realizaron ensayos utilizando gradientes discontinuos de Percoll con densidades entre 1,138 (95%) y 1,107 (60%), preparados en PBS 0,15M y sucrosa 0,25M, a través de los cuales se centrifugaron suspensiones de micelio y conidias por 60min., 1800g a 4°C. Los mejores resultados se obtuvieron con los gradientes de 95 y 90% en sucrosa. Con el primero de ellos la pureza de las conidias estuvo entre 70,6 y 100%, con una media de 82,3 y un coeficiente de variación (CV) de 11,7. En el caso de gradientes de 90%, la pureza estuvo entre 70,4 a 92,5%, con una media de 80,6% y un CV de 9,2%. La eficiencia de recuperación fue de 4,5± 3,3 x 106 conidias/caja para gradientes de 95% y de 6,1 ± 2,2 x 106 conidias/caja para los de 90%. La viabilidad en todos los casos fue superior al 90%. Este método permite disponer de inóculos de conidias con menor contaminación de fragmentos miceliares, para así lograr un mejor control de los modelos experimentales.