Efecto, en un modelo murino, de dos polisacáridos sulfatados sobre la producción de citoquinas por células NK uterinas y de sangre periférica - Bueno Sánchez, Julio César; Peña, Beatriz; Cadavid Jaramillo, Angela Patricia (Iatreia, 2000)
Las células asesinas naturales (NK) uterinas son una subpoblación diferente a las de sangre periférica, expresan los marcadores CD56bright y CD16- y constituyen los linfocitos más abundantes de la decidua humana (70%). Estas células juegan un papel protagónico en el aloreconocimiento del feto, en el control de la invasión del trofoblasto y promueven el crecimiento de la unidad fetoplacentaria mediante la producción del factor estimulante de colonias de granulocitos y macrófagos y del factor estimulante de colonias de monocitos (CSF-1). En los ratones transgénicos Tg2978 deficientes en células NK se presenta una reducción de hasta un 66% en su viabilidad intrauterina y una disminución del 45% en el tamaño placentario señalando la estrecha relación de estas células con la biología de la reproducción. De otro lado existen pruebas directas e indirectas de que las células NK podrían ser responsables en algunos casos de falla del embarazo. Diversos tratamientos para el aborto recurrente espontáneo (ARE) regulan negativamente el número y la actividad de las células NK como los glicosaminoglicanes sulfatados, y en especial la heparina, que bloquean in vitro su actividad lítica, tal como lo ha demostrado nuestro grupo. En estudios clínicos de pacientes con ARE de causa inmunológica se observa un efecto benéfico de la combinación heparina-aspirina con o sin inmunizaciones con linfocitos, por lo cual se propone como una posible terapia de esta alteración. Se ha visto además que otro polisacárido sulfatado, el fucoidan, estimula la producción del factor de crecimiento hepático y presenta una estructura química similar a la de la heparina, con la ventaja de presentar efectos anticoagulantes mínimos. En este proyecto se trabajará con un modelo murino porque las características de la placentación son similares a las del humano, por la facilidad de su manipulación y, ante todo, por la dificultad para trabajar con muestras de pacientes con abortos electivos ya que en Colombia esta práctica es ilegal. Tampoco es posible trabajar con células procedentes de abortos espontáneos debido a que entran rápidamente en apoptosis, lo cual imposibilita cualquier estudio funcional. Este estudio pretende determinar el posible efecto de la heparina y el fucoidan sobre la producción de las citoquinas CSF-1, el factor inhibidor de la leucemia y el interferón gamma, por las células NK uterinas y de sangre periférica en el modelo murino C57BL/6. Se ha elegido trabajar con esta cepa por ser la más utilizada en el estudio de las células NK y por contar con un anticuerpo monoclonal, PK136, que permite identificar poblaciones celulares de alta pureza. En el protocolo experimental se utilizarán hembras C57BL/6 sacrificadas a los días 7 a 8 de la gestación, de las cuales se aislarán las células NK uterinas y esplénicas. Luego de un procedimiento de enriquecimiento y purificación se cultivarán con diferentes concentraciones de los polisacáridos sulfatados: heparina de bajo peso molecular y fucoidan; posteriormente se obtendrá el RNA mensajero de las células NK a las 24 horas de cultivo y se someterá a RT-PCR para identificar las citoquinas antes mencionadas. Los productos de la amplificación se correrán en una electroforesis en gel de agarosa y se visualizarán bajo luz ultravioleta después de teñirlas con bromuro de etidio. Luego de un análisis semicuantitativo de las señales obtenidas se realizará un análisis de varianzas para comparar los diferentes tratamientos.