Evaluación de dos métodos de criopreservación sobre la calidad de embriones producidos in vitro

Abstract

Resumen

Con el objetivo de comparar  dos métodos de criopreservación,  Congelación Lenta (CL) y Vitrificación (V) sobre  la calidad  (morfología y nuclearidad) de embriones bovinos producidos in-vitro; blastocitos de excelente calidad (90-100 células),   fueron criopreservados  por CL (77) y V (50)  y evaluados por microscopía óptica al  descongelamiento y posterior a 12 horas de cultivo.  La morfología y la nuclearidad fueron registradas: Compacto, Parcialmente Expandido, Expandido, Picnótico y Fragmentado;   < 40, 40-60,  61-80 y >80 núcleos. Al descongelamiento los embriones Parcialmente Expandidos se caracterizaron por tener  < 40 núcleos.  Los embriones Compactos y Expandidos presentaron la mayor cantidad de núcleos (61-80;>80).  El 57.3% de los embriones presentaron  < 40 núcleos.   El 17.7% de los embriones presentaron más de 60 núcleos. A las 12 horas el 36.6% de los embriones presentó más de 60 núcleos,  recuperándose en un 132.7% con el cultivo.  No existió diferencia entre las técnicas de criopreservación (p>0.05) en ninguna de las fases.  Al evaluar conjuntamente ambas fases,   todos los embriones con más de 60 núcleos al descongelamiento,  aumentaron su nuclearidad  durante el cultivo y algunos (20%) de los que presentaron baja nuclearidad pasaron a tener más de 60 núcleos,  y aunque expandieron,  presentaron picnosis.   Los embriones con  < 40 núcleos,  presentaron compactación y picnosis.  Los embriones con 40-60 núcleos aunque expandieron,  presentaron picnosis y fragmentación. Más que al método de criopreservación,  las alteraciones celulares observadas  podrían deberse a características propias de los embriones producidos in-vitro.  Se necesitan nuevas investigaciones que caractericen  posibles factores de competencia embrionaria  para soportar  procesos de criopreservación, ya que algunos embriones   resisten sin problema dicha práctica.

Palabras clave: congelación, FIV, vitrificación.

Summary

The aim of this study was to compare two cryopreservation methods,   Cooling (Standard method) and Vitrification, on quality (morphology and nuclearity) of bovine in-vitro produced embryos.  Good quality bovine blastocysts (90-100 cells) were preserved using Cooling (n=77) and Vitrification (n=50) protocols and then evaluated by optic microscopy at thawing and after 12 hours of culture after thawing.  Morphology and nuclearity were registered: Compacted, Partially Expanded, Expanded, Picnotic and Fragmented;  < 40, 40-60, 61-80 and >80 nucleus.  At thawing, compact and expanded embryos showed a greater amount of nucleus (61-80; < 80) whereas partially expanded embryos had  < 40 nucleus.  57.3% of embryos showed  < 40 nucleus and 17.7% more than 60 nucleus.  At 12 hours of culture after thawing, 36.6% of embryos showed more than 60 nucleus, improving nuclearity on 132.7% with culture.  There was not any difference between criopreservation techniques employed (p>0.05) neither at thawing nor after 12 hours culture.   Evaluating both moments,   all of embryos that has showed more than 60 nucleus improved their nuclearity  during culture and some of them (20%) that has showed a low  nuclearity become to have more than 60 nucleus,  and  although they got expanded,  they showed picnosis.   < 40 nucleus embryos showed compactation and picnosis, moreover, 40-60 nucleus embryos become expanded although,  they revealed picnosis and fragmentation.  Rather than criopreservation method,  cellular disturbance  may be due to  certain in-vitro embryo features, because some of them are  more resistant . It is necessary to make new works to characterize in-vitro embryo  factors that make them more competent to support criopreservation.

Key words: cooling, IVF, vitrification.