Comparación de dos protocolos de extracción de ADN para la detección de infección por Plasmodium spp. en Anopheles spp.

Resumen

Introducción

La detección de anofelinos infectados por Plasmodium spp. se ha realizado tradicionalmente por medio de microscopia óptica e inmunoensayos. Actualmente, las metodologías basadas en la técnica de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), proveen una alta sensibilidad y especificidad; sin embargo, algunos autores han reportado que inhibidores, presentes en el cuerpo del mosquito, pueden disminuir la sensibilidad de la PCR para la detección de Plasmodium spp., y tal efecto podría reducirse con la utilización de protocolos de extracción de ADN que remuevan de forma eficiente los inhibidores potenciales.

ObJetivo

Comparar dos protocolos de extracción de ADN para la detección de infección por Plasmodium spp. en Anopheles spp.

Materiales y métodos

Se seleccionaron diez mosquitos Anopheles stephensi infectados con Plasmodium falciparum, previamente disectados, para separar cabeza-tórax de abdomen, que fueron evaluados por dos protocolos de extracción: uno con resina quelante y otro sin resina; se realizaron diluciones del producto de extracción y se amplificó el DNA por PCR anidada. Se compararon las diferencias entre las frecuencias de amplificación mediante la prueba t-Student y las hipótesis fueron probadas aplicando la prueba de diferencia entre las proporciones de dos poblaciones.

Resultados

En especímenes cuyo ADN fue extraído usando el protocolo sin resina quelante la amplificación de ADN del parásito fue de 11,6%, y con el protocolo con resina fue 6,6%. Del total de las amplificaciones, un 20% correspondieron a material de extracción sin dilución y un 7,5% a material de extracción diluido 1:10; la diferencia entre las proporciones de amplificación fue estadísticamente significativa (p<0,05).

Conclusiones

El protocolo que con mayor eficiencia permitió detectar ADN del parásito en ADN extraído de mosquitos fue aquel al que no se añadió resina quelante; con este, la amplificación fue aproximadamente dos veces mayor que con el protocolo con resina.