Comparación del ensayo de interferón gamma bovino con técnicas tradicionales para el diagnóstico de infección con Mycobacterium bovis en la Región Metropolitana de Chile

Abstract

Resumen

La tuberculosis bovina es una enfermedad infectocontagiosa de importancia económica y sanitaria en los planteles bovinos de países en desarrollo. La prueba cutánea de hipersensibilidad con derivado proteico purificado (PPD) de M. bovis ha sido la técnica más ampliamente utilizada para su diagnóstico, aunque presenta deficiencias en sensibilidad y especificidad, además de requerir una segunda inspección del animal para su interpretación. Con el fin de superar estos problemas se ha desarrollado el ensayo de IFN bovino, que detecta la producción de esta citoquina por linfocitos del propio animal infectado. Diversos estudios han determinado que su eficiencia diagnóstica es similar a la prueba de tuberculina, pero ofrece la ventaja de requerir una sola manipulación del animal. El objetivo de este trabajo es comparar los resultados de un ensayo de IFN bovino (Bovigam®, CSL Ltd.,Melbourne, Australia) con tres técnicas tradicionales de diagnóstico, aplicadas generalmente en tejidos de animales beneficiados: examen post-mortem, tinción de Ziehl Neelsen y cultivo bacteriológico. Para ello, se eligieron un total de 142 muestras desde dos mataderos de la Región Metropolitana de Chile, consistentes en un trozo de ganglio mediastinal (20-40 gr) y sangre entera. Para confirmar el cultivo primario, se realizó una reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para la amplificación de la secuencia de inserción (IS) 1081, específica de las bacterias del complejo M. tuberculosis. Los resultados de las comparaciones solo indicaron diferencias significativas (p < 0.01) entre las técnicas de cultivo bacteriológico y baciloscopía. En cuanto al nivel de concordancia,  todas las pruebas demostraron valores significativos (p < 0.01), aunque las mejores comparaciones se observaron entre las técnicas tradicionales. El ensayo de IFN detectó a solo cinco de nueve individuos con infección confirmada por bacterias del complejo M. tuberculosis y mostró reactividad con otros nueve animales donde el cultivo bacteriológico no detectó infección. Además, identificó 26 reaccionantes (18%) al antígeno PPD de M. avium, demostrando una alta presencia de micobacterias atípicas o ambientales. A pesar de su simpleza, estandarización y mayor rapidez, la concordancia de sus mediciones con las otras pruebas de diagnóstico no es buena, requiriéndose el desarrollo de otros estudios que complementen su evaluación como prueba potencial para el diagnóstico de tuberculosis bovina en nuestro país.

Palabras clave: ensayo de IFNγ, tuberculosis bovina.

Summary

Bovine tuberculosis is an infectious disease of the great economic and sanitary importance in cattle from developing countries. The intradermal tuberculin test using purified protein derivative (PPD) from Mycobacterium bovis has been the widest used diagnostic technique, although it has some sensitivity and specificity deficiencies and requires a second inspection of the animal for its interpretation. Trying to overcome these restrictions a bovine gamma-interferon (INF ) assay has been developed, which detects this cytokine produced by lymphocytes of the infected animal. Several studies have determined that its diagnostic efficiency is similar to the tuberculin test, but it gives the advantage of only one contact with the animal. In this work the bovine INF assay, Bovigam (CSL Ltd. Australia), was compared with three traditional diagnostic techniques used for tuberculosis diagnosis in slaughtered animals: post-mortem examination, Ziehl-Neelsen stain, and bacteriological culture. For this purpose, mediastinal lymph nodes (20-40g) and heparinized blood samples from 142 animals slaughtered in meat processing plants of the Región Metropolitana, Chile, were collected. To confirm the primary culture, a PCR test was performed by amplification of the insertion sequence (IS) 1081, which is specific for species of the M. tuberculosis complex. Comparison of results showed significant differences (p < 0.01) between bacteriological culture and Ziehl-Neelsen stain. In respect with the concordance level, all the techniques gave significant values (p < 0.01), although the best concordances were obtained among the traditional tests. The bovine INF assay detected only in five of nine animals with confirmed infection by culture of bacteria belonging to the M. tuberculosis complex and showed reactivity in nine animals which cultures were negative. Furthermore, identified 26 reactors (18%) to the M. avium PPD antigen, which means a high presence of atypical or environmental mycobacteria. Instead of simplicity, standardisation and celerity, the concordance with the other diagnostic tests considered in this study was poor, and more work to complete the evaluation as a potential test for bovine tuberculosis diagnosis in local epidemiological condition is required.

Key words: bovine tuberculosis, diagnosis, INFγ assay.