Simplificação da fecundação de oócitos durante produção in vitro de embriões de bovinos
DOI:
https://doi.org/10.17533/udea.rccp.324310Palavras-chave:
centrifugação de sêmen, embriões bovinos, fertilização invitroResumo
O objetivo deste estudo foi avaliar um novo procedimento de fertilização in vitro (FIV) de oócitos bovinos, que foi omitida na centrífuga esperma lavar os processos de seleção e de esperma. Dentro de cada um dos poços pratos convencionais quatro poços (poços externa) um novo bem menor (poços internos) cerca de 50 μl fato em vidro (0,3 mm de altura por 0,8 mm de diâmetro) foram introduziu. O procedimento foi de encher poços interna e externamente com 700 μ l meio de fertilização, até que a fossa foi coberto por meios internos e, em seguida, depositadas 10 CCOs em poços internos; então 30 μl previamente descongelados sêmen foi depositado no fundo da cova fora. Depois de uma hora é retirada a todo o conteúdo da cova, e foi deixada fora da doméstica no conteúdo do bem com o ambiente e células germinativas por um período de incubação de 16 h. A alegada zygotes foram cultivados em meio CR1aa por um período de 7 dias com uma mudança no meio-72h. Como um controle, utilizado uma gradiente de Percoll 45-90% de selecção de espermatozóides. A taxa de oócitos foi dividida (70.8 vs 73.1) e da proporção de oócitos que atingiu o estádio e foi Mórula blastocisto (18.8 vs 20.3), respectivamente. Os resultados obtidos com a nova metodologia proposta são semelhantes aos obtidos com a metodologia convencional (p<0.05). Estes resultados indicam que ambos os métodos produzem resultados semelhantes, mas a nova proposta metodológica economiza tempo, é menos trabalhoso, consome menos reativo e reduzem a manipulação de células espermáticas com bons potenciais efeitos na melhoria dos procedimentos reprodução in vitro
Downloads
Referências
Aitken RJ, Clarkson S. Significance of reactive oxigen species and antioxidants in defining the efficacy of sperm preparation.techniques ..J.Androl.1988;.9:367-376 . DOI: https://doi.org/10.1002/j.1939-4640.1988.tb01067.x
..Blondin.P,.Sirard,.MA ..Oocyte.and.follicular.morphology.as .determining.characteristics.for.developmental.competence.in.bovine.oocyte ..Mol.Rep.Dev.1995;.41:54-62 . DOI: https://doi.org/10.1002/mrd.1080410109
..Blondin.P,. Bousquet.D,.Twagiramungu.H,.Barnes.F,. Sirard.MA ..Manipulation.of.follicular.developmental.to.produce.developmentally.competent.bovine.oocytes ..Biol.Reprod.2002;.66:38-43 . DOI: https://doi.org/10.1095/biolreprod66.1.38
..Correa.JR,.Zavos.PM ..Preparation.and.recovery.of.frozen-thawed.bovine.spermatozoa.via.various.sperm.selection.techniques.employed.in.assisted.reproductive.technologies ..Theriogenology.1996;.7:1225-1232 . DOI: https://doi.org/10.1016/S0093-691X(96)00293-2
..Dode.MAN,.Rodovhalo.NC,.Ueno.VG,.Fernandes.CE ..The.effect.of.sperm.preparation.and.co-Incubation.time.on.in.vitro.fertilization.of.Bos indicus oocytes ..Anim.Reprod.Sci.2002;.69:15-23 . DOI: https://doi.org/10.1016/S0378-4320(01)00148-8
..Flesh.F,.Gadella.B ..Dynamics.of.the.mammalian.sperm.membrane.in.the.process.of.fertilization ..Biochim.Byophys.Acta.2000;.1469:197-235 . DOI: https://doi.org/10.1016/S0304-4157(00)00018-6
..Harrison.RAP .. Capacitacion.mechanims,.and.the.role.of.capacitacion.as.seen.in.eutherian.mammals ..Reprod.Fertil.Dev.1996;.8:581-594 . DOI: https://doi.org/10.1071/RD9960581
..Hawk.HW,.Wall.RJ ..Improved.yields.of.bovine.blastocysts.from.in vitro produced.oocytes ..I ..Selection.oocytes.and.zygotes ..Theriogenology.1994;.41:1571-83 . DOI: https://doi.org/10.1016/0093-691X(94)90822-Z
..Knobil. E. and. Neill. JD. editors ..The. physiology. of.reproduction ..2nd.ed ..New.York:.Raven.Press ..1994 .
Kochhar HS, Kochhar KP, Basrur PK, King �A. Influence of.the.duration.of.gamete.interaction.on.cleavage,.growth.rate.and.sex.distribution.of.in vitro. produced.bovine.embryos ..Anim.Reprod.Sci.2003;.77:33-49 . DOI: https://doi.org/10.1016/S0378-4320(03)00006-X
..Leibfried.ML,.Critser.ES,.Parrish.JL,.Fist.NL ..In vitro. maturation.and.fertilization.of.bovine.oocytes ..Theriogenology.1989;.31:61-74 .12 ..Mortimer.D ..Sperm.recovery.techniques.to.maximize.fertilizing.capacity ..Reprod.Fertil.Dev.1994;.6:.25-31 . DOI: https://doi.org/10.1016/0093-691X(89)90564-5
..Niwa.K,.Ohgoda.O ..Synergistic.effect.of.caffeine.and.heparin.of.in vitro. fertilization.of.cattle.oocyte.mature.in.culture ..Theriogenlogy.1988;.30:733-741 . DOI: https://doi.org/10.1016/0093-691X(88)90308-1
..Parrish. JJ,. Krogeneas. A,. Susko-Parrish. L .. Effect. of.bovine. sperm. separation. by. either. swim-up. or . percoll.method.on.success.of.in vitro. fertilization.and.early.embryonic.development ..Theriogenlogy.1995;.44:859-869 . DOI: https://doi.org/10.1016/0093-691X(95)00271-9
..Pope.CE,.Mcrae.MA,.Plair.BL,.Keller.GL,.Dresser.BL ..In vitro.and.in vivo.developmental.of.embryos.produced.by.in.vitro.maturation.and.in vitro. fertilization.of.cat.oocytes ..J.Reprod.Fertil.1997;.51:69-82 .16 ..Prakash.P,.Leyki.NL,.Chen.T,.Sayegh.R,.Schiff.I,.et al..Preparation.by.differential.gradient.centrifugation.is.better.than.swim-up.in.selection.of.sperm.with.normal.morphology.(strict.criteria) ..Fertil.Steril.1998;.69:722-726 . DOI: https://doi.org/10.1016/S0015-0282(98)00002-8
Risopatrón J, Sánchez R, Sepúlveda N, Peña P, Villagran E.et al. Migration./sedimentation.sperm.selection.method.used.in.bovine.in vitro. fertilization:.comparison.with.washing/centrifugation ..Theriogenlogy.1996;.46:65-73 . DOI: https://doi.org/10.1016/0093-691X(96)00142-2
..Rodriguez-Martínez.H,.Larsson.B,.Pertoft.H ..Evaluation.of.sperm.damage.and.techniques.for.sperm.clean-up ..Reprod.Fertil.Dev.1997;.9:297-308 . DOI: https://doi.org/10.1071/R96081
Sánchez R, Risopatron J, Sepúlveda G, Peña P, Miska W .. Evaluation. of . the. acrosomal. membrane. in . bovine.spermatozoa:.effects.of .proteinase.inhibitors .. Theriogenology.1994;.43:761-768 ..
..Sánchez.R,.Risopatrón.J,.Sepulveda.G,.Peña.P,.MiSka.W .. Evaluation.of.the.acrosomal.membrane.in.bovine.spermatozoa:.Effects.of.Proteinase.Inhibitars ..Theriogenlogy.1995;.45:.761-768 . DOI: https://doi.org/10.1016/0093-691X(95)00018-4
..Takahashi.M,.Keicho.K,.Takahashi.H,.Ogawa.H,.Schultz.M.et al. Effect.of.oxidative.stress.on.development.and.DNA.damage.in.in vitro cultured.bovine.embryos.by.comet.assay ..Theriogenology.2000;.54:137-145 . DOI: https://doi.org/10.1016/S0093-691X(00)00332-0
..Tea. NT,. Jondet. M,. Scholler. R .. Procede. d’isolement.des. spermatozoides. mobiles. du. sperme. humain. por. la.méthode de “migration-sedimentation”. Path Biol 1983; 31:688-690 .
..Thompson.JG .. Culture.without.the.petri-dish .. Theriogeniology.2007;.67:16-20 . DOI: https://doi.org/10.1016/j.theriogenology.2006.09.016
..Twigg.J,.Irvine.DS,.Houston.P,.Foulton.N,.Michale.L,.et al ..Iatrogenic.DNA.damage.induced.in.human.spermatozoa.during sperm preparation: protective significance of seminal.plasma ..Mol.Hum.Reprod.1998;.4:439-444 . DOI: https://doi.org/10.1093/molehr/4.5.439
Vajta G, Peura TT, Holm P, Páldi A, Greve T, et al .. NewNew.method.for.culture.of.zona-included.or.zona-free.embryos:.the.well.of.the.well.(WOW).system ..Mol.Rep.Dev.2000;.55:256-264 . DOI: https://doi.org/10.1002/(SICI)1098-2795(200003)55:3<256::AID-MRD3>3.0.CO;2-7
Vivanco �. Mejoramiento genético bovino a través de tecnologías.reproductivas.de.avanzada ..III.Seminario.Internacional ..Competitividad.en.Leche.y.Carne.2002;.227-247 .
..Ward.F,.Enright.B,.Rizos.D,.Boland.M,.Lonergan.P ..Optimization.of.in vitro. bovine.embryo.production:.effect.of.duration.of.maturation,.lenght.of.gamete.co-incubation,.sperm.concentration.and.sire ..Theriogenology.2002;.57:2105-2117 . DOI: https://doi.org/10.1016/S0093-691X(02)00696-9
Downloads
Publicado
Como Citar
Edição
Seção
Licença
Copyright (c) 2016 Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias
Este trabalho está licenciado sob uma licença Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 4.0 International License.
Os autores autorizam a RCCP a reimprimir o material nela publicado.
A revista permite que o(s) autor(es) detenham os direitos autorais sem restrições, e permitirá que o(s) autor(es) mantenham os direitos de publicação sem restrições.