Utilização de colorimetria em um novo teste LAMP para a detecção visual de Chlamydia abortus em ruminantes domésticos
DOI:
https://doi.org/10.17533/udea.rccp.e358631Palavras-chave:
Chlamydia abortus, colorimetría, diagnóstico, isotérmica, LAMP, molecular, otimização, validação, zoonoseResumo
Antecedentes: Chlamydia abortus é o agente etiológico do aborto enzoótico ovino (OEA), uma doença mundial que impacta significativamente a produção de bovinos, ovinos e caprinos. Esta bactéria causa abortos durante o último terço da gestação e é zoonótica. A falta de sintomas prévios antes de um evento abortivo complica o diagnóstico clínico da OEA e a sua diferenciação de outras infecções, destacando a necessidade de uma ferramenta diagnóstica eficaz. Alguns métodos de diagnóstico convencionais podem ser precisos, mas em alguns casos requerem equipamentos caros e pessoal altamente treinado, limitando a sua aplicação em campo. Neste contexto, a amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) surge como uma alternativa acessível e eficiente, capaz de operar a temperatura constante e simplificar visualmente a interpretação dos resultados através da colorimetria. Objetivo: Validar um novo ensaio LAMP utilizando colorimetria para detecção visual de Chlamydia abortus em ruminantes domésticos. Métodos: Cinquenta e seis amostras de DNA coletadas de ruminantes com histórico de aborto foram usadas como controles biológicos de referência.. Primers LAMP específicos foram projetados para o gene TARP do C. abortus. Foi validado um ensaio colorimétrico para o teste LAMP de C. abortus (crLAMP-Chla). Os parâmetros de concordância (K), sensibilidade (Se) e especificidade (Sp) do crLAMP-Chla foram calculados usando a PCR em tempo real como referência. Resultados: O crLAMP-Chla detectou o patógeno após 15 minutos a 65 °C, mesmo em baixas concentrações de DNA. Os valores de K, Se e Sp foram 1, 100% e 100% (P=0,05), respectivamente. Conclusões: Essa metodologia representa um avanço significativo para o controle de C. abortus em ruminantes, fornecendo uma ferramenta de diagnóstico acessível e eficiente para melhorar a saúde pública e animal.
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Referências
Aldama F, Montes de Oca R, Varela J. Diagnóstico, prevención y control de enfermedades causadas por Chlamydia en pequeños rumiantes. Rev Mex Cienc Pecu 2022; 13 (3): 725-742. https://doi.org/10.22319/rmcp.v13i3.5564
Alhamid G, Tombuloglu H, Motabagani D, Motabagani D, Rabaan AA, Unver K, Dorado G, Al-Suhaimi E, Unver T. Colorimetric and fluorometric reverse transcription loop-mediated isothermal amplification (RT-LAMP) assay for diagnosis of SARS-CoV-2. Funct Integr Genomics 2022; 22(6):1391-1401. https://doi.org/10.1007/s10142-022-00900-5
Aragón-López C, Luna-Nevárez P, Ortiz-Encinas V, Leyva-Corona J, Cantú-Soto Ernesto, Reyna-Granados J. Detección molecular de Ehrlichia canis, Anaplasma platys y Rickettsia rickettsii en caninos domésticos del municipio de Cajeme, Sonora, México. Abanico veterinario 2021; 11: 1-15. http://dx.doi.org/10.21929/abavet2021.45
Aragón López CE, Palomares Reséndiz EG, Cuevas Tellechea S, Reyna Granados JR, Arellano Reynoso B, Sánchez Castro MA, Morales Pablos MI. Standardization of an isothermal test as a novel diagnostic tool in México for the molecular detection of Chlamydia abortus in small ruminants. Biotecnia 2024; 26: 77–82. https://doi.org/10.18633/biotecnia.v26i1.2109
Azzimonti Renzo JC. La concordancia entre dos tests clínicos para casos binarios: problemas y solución. Acta bioquímica clínica latinoamericana 2005; 39(4): 435-444. https://www.scielo.org.ar/scielo.php?pid=S0325-29572005000400004&script=sci_abstract
Barati S, Moori-Bakhtiari N, Najafabadi MG, Momtaz H, Shokuhizadeh L. The role of zoonotic chlamydial agents in ruminants abortion. Iran J Microbiol 2017; 9: 288–294. PMCID: https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC5748448/
Bush RM, Everett KD. Molecular evolution of the Chlamydiaceae. Int J Systema Evol Microbiol 2001; 51(1): 203-220. https://doi.org/10.1099/00207713-51-1-203
Diario oficial de la federación (DOF). Acuerdo mediante el cual se dan a conocer en los Estados Unidos Mexicanos las enfermedades y plagas exóticas y endémicas de notificación obligatoria de los animales terrestres y acuáticos. Ciudad de México, México 2018. https://dof.gob.mx/nota_detalle.php?codigo=5545304&fecha=29/11/2018
Fakruddin MD. Loop mediated isothermal amplification (LAMP) an alternative to polymerase chain reaction (PCR). Bangla Res Publ J 2011; 5(4). http://www.bdresearchpublications.com/admin/journal/upload/09235/09235.pdf
Landis JR, Koch GG. The measurement of observer agreement for categorical data. Biometrics 1977; 33(1); 159-74. PMID: 843571.
Limón-González M, Flores-Pérez C, Sánchez-Rodríguez O, Hernández-Castro R, Arellano-Reynoso B, Herrera-López E, Palomares-Resendiz E. Coinfección con Chlamydia abortus y Coxiella burnetii en vacas, cabras y borregas que presentaron aborto. Abanico Vet 2024; 15: 1-9. http://dx.doi.org/10.21929/abavet2024.10
Lin GZ, Zheng FY, Zhou JZ, Wang GH, Cao XA, Gong XW, Qiu CQ. Loop-mediated isothermal amplification assay targeting the MOMP gene for rapid detection of Chlamydia psittaci abortus strain. Pakistan Vet J 2012; 32(2): 273-276. http://www.pvj.com.pk/pdf-files/32_2/273-276.pdf
Martínez-Serrano MG, Díaz-Aparicio E, Palomares-Reséndiz G, Tórtora-Pérez JL, Ramírez-Álvarez H, Ortega-Hernández N, Salinas-Lorente J, Morales-Álvarez JF, Cervantes-Morali JJC. Presence of Chlamydia abortus in colostrum, milk and vaginal discharge samples of sheep. Rev Colomb Cienc Pecu 2022; 35(3): 165–173. https://doi.org/10.17533/udea.rccp.v35n2a04
Notomi T, Mori Y, Tomita N, Kanda H. Loop-mediated isothermal amplification (LAMP): principle, features, and future prospects. J Microbiol 2015; 53(1):1-5. https://doi.org/10.1007/s12275-015-4656-9
Peltzer D, Tobler K, Fraefel C, Maley M, Bachofen C. Rapid and simple colorimetric loop-mediated isothermal amplification (LAMP) assay for the detection of Bovine alphaherpesvirus 1. J Virol Meth 2020; 289, 114041. https://doi.org/10.1016/j.jviromet.2020.114041
Ramos B. Determinación de la frecuencia de aborto enzootico en cabras del cantón Zapotillo de la provincia de Loja. Universidad Nacional de Loja, Ecuador 2023. https://dspace.unl.edu.ec/jspui/handle/123456789/27958
Sierra A, Camelo D, Lota C, Arenas NE, Soto CY. Specific identification of Mycobacterium bovis by Loop-Mediated Isothermal Amplification (LAMP) targeting the Region of Difference 12 (RD12) of the M. tuberculosis complex. MethodsX 2023; 10, 102223. https://doi.org/10.1016/j.mex.2023.102223
Turin L, Surini S, Wheelhouse N, Rocchi MS. Recent advances and public health implications for environmental exposure to Chlamydia abortus: from enzootic to zoonotic disease. Vet Res 2022; 53(1):37. https://doi.org/10.1186/s13567-022-01052-x
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