Cristalización de la endonucleasa EndoG recombinante de Leishmania (Viannia) panamensis
DOI:
https://doi.org/10.17533/udea.acbi.329004Palabras clave:
crystallization, EndoG, hanging-drop, Leishmania, refoldingResumen
Antecedentes y objetivos: La endonucleasa G (EndoG) es una enzima que escinde específicamente en las posiciones dG y dC del ADN de cadena doble y se ha demostrado que participa en la degradación de la cromatina durante el proceso de apoptosis en Leishmania. El objetivo principal de este trabajo fue la purificación y cristalización de EndoG como preámbulo para los estudios estructurales futuros que permitan entender detalladamente el funcionamiento de esta enzima. Materiales y métodos: La proteína EndoG fue purificada en condiciones desnaturalizantes usando cromatografía de Ni, luego fue renaturalizada in vitro y cristalizada por el método de difusión de vapor por gota colgante. Resultados y conclusión: La proteína EndoG de Leishmania (viannia) panamensis fue sobreexpresada, renaturalizada, purificada y demostró estar enzimáticamente activa. Aquí, se registra la primera cristalización exitosa de la proteína EndoG de este grupo de parásitos protozoarios. La proteína fue cristalizada por el método de difusión de vapor por gota colgante. Se obtuvieron cristales de alta calidad de EndoG que posiblemente nos permitirán determinar la estructura tridimensional de EndoG usando difracción de rayos-X.
Descargas
Citas
Cudney R, Patel S, Weisgraber K, Newhouse Y, McPherson A. 1994. Screening and optimization strategies for macromolecular crystal growth. Acta Crystallographica Section D, 50 (4): 414-423.
Dolai S, Pal S, Yadav RK, Adak S. 2011. Endoplasmic reticulum stress-induced apoptosis in Leishmania through Ca2+-dependent and caspase-independent mechanism. Journal of Biological Chemistry, 286 (15): 13638-13646.
Estaquier J, Vallette F, Vayssiere JL, Mignotte B. 2012. The mitochondrial pathways of apoptosis. Advances in Experimental Medicine and Biology, 942:157-183.
Gannavaram S, Vedvyas C, Debrabant A. 2008. Conservation of the pro-apoptotic nuclease activity of endonuclease G in unicellular trypanosomatid parasites. Journal of Cell Science, 121 (1): 99-109.
Kobets T, Grekov I, Lipoldova M. 2012. Leishmaniasis: prevention, parasite detection and treatment. Current Medicinal Chemistry, 19 (10): 1443-1474.
Kumar P, Lodge R, Trudel N, Ouellet M, Ouellette M, Tremblay MJ. 2010. Nelfinavir, an HIV-1 protease inhibitor, induces oxidative stress-mediated, caspase-independent apoptosis in Leishmania amastigotes. PLoS Negleted Tropical Diseases, 4 (3): e642.
Naderer T, McConville MJ. 2011. Intracellular growth and pathogenesis of Leishmania parasites. Essays in Biochemistry, 51: 81-95.
Rico E, Alzate JF, Arias AA, Moreno D, Clos J, Gago F, Moreno I, Dominguez M, Jimenez-Ruiz A. 2009. Leishmania infantumexpresses a mitochondrial nuclease homologous to EndoG that migrates to the nucleus in response to an apoptotic stimulus. Molecular and Biochemical Parasitology, 163 (1): 28-38.
Ruiz-Carrillo A, Renaud J. 1987. Endonuclease G: a (dG)n X (dC)n-specific DNase from higher eukaryotes. The EMBO Journal, 6 (2): 401-407.
Saha P, Sen R, Hariharan C, Kumar D, Das P, Chatterjee M. 2009. Berberine chloride causes a caspase-independent, apoptotic-like death in Leishmania donovani promastigotes. Free Radical Research, 43 (11): 1101-1110.
Toro L, Patiño E, Robledo S, Jiménez RA, Alzate JF. 2011. Leishmania (Viannia) panamensis expresses a nuclease with molecular andbiochemical features similar to the Endonuclease G of higher eukaryotes. Colombia Médica, 41(2): 154-165.
Van Zandbergen G, Bollinger A, Wenzel A, Kamhawi S, Voll R, Klinger M, Müller A, Hölscher C, Herrmann M, Sacks D, Solbach W, Laskay T. 2006. Leishmania disease development depends on the presence of apoptotic promastigotes in the virulent inoculum. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 103 (37): 13837-13842.
Vařecha M, Potěšilová M, Matula P, Kozubek M. 2012. Endonuclease G interacts with histone H2B and DNA topoisomerase II alpha during apoptosis. Molecular and Cellular Biochemistry, 363 (1-2): 301-307.32
Publicado
Cómo citar
Número
Sección
Licencia
Derechos de autor 2017 Actualidades Biológicas
Esta obra está bajo una licencia internacional Creative Commons Atribución-NoComercial-CompartirIgual 4.0.
Los autores autorizan de forma exclusiva, a la revista Actualidades Biológicas a editar y publicar el manuscrito sometido en caso de ser recomendada y aceptada su publicación, sin que esto represente costo alguno para la Revista o para la Universidad de Antioquia.
Todas las ideas y opiniones contenidas en los artículos son de entera responsabilidad de los autores. El contenido total de los números o suplementos de la revista, está protegido bajo Licencia Creative Commons Reconocimiento-NoComercial-CompartirIgual 4.0 Internacional, por lo que no pueden ser empleados para usos comerciales, pero sí para fines educativos. Sin embargo, por favor, mencionar como fuente a la revista Actualidades Biológicas y enviar una copia de la publicación en que fue reproducido el contenido.
