Interacción de la proteína TcdE y la toxina B intracelular de genotipos epidémicas de Clostridiodes difficile

Carlos Quesada-Gómez; Gabriela Jiménez-Hurtado

doi:10.17533/udea.hm.v16n1a03

Autores/as

Carlos Quesada-Gómez Facultad de Microbiología y Centro de Investigación en Enfermedades Tropicales, Universidad de Costa Rica. https://orcid.org/0000-0002-2293-8257
Gabriela Jiménez-Hurtado Universidad de Costa Rica

DOI:

https://doi.org/10.17533/udea.hm.v16n1a03

Palabras clave:

Clostridiodes difficile, toxinas bacterianas, TcdE, TcdB

Resumen

Introducción: Clostridiodes difficile es un microorganismo anaerobio que ocasiona cuadros de diarrea, principalmente en pacientes hospitalizados y con tratamiento antibiótico. En donde se han dado reportes sobre genotipos hipervirulentos y epidémicos, como NAP1/RT027. Entre sus factores de virulencia se encuentran dos toxinas secretadas con actividad glicosil-transferasa: TcdA y TcdB. Actualmente existe poca claridad del mecanismo preciso a través del cual estas toxinas son secretadas al espacio extracelular. Existe distintos resultados de la participación de la proteína TcdE, parecida a una holina, en la secreción transmembrana de TcdA y TcdB son secretadas a través de esa proteína transmembrana. Objetivo: Comprender los mecanismos de secreción de TcdB en su relación con la interacción bioquímica de la toxina intracelular con TcdE en cepas de genotipos hipervirulentos.

Metodología: Cepas de los genotipos NAP1/RT027/ST01 y NAP1/RT019/ST67 fueron lisadas para la detección de TcdB intracelular mediante Western Blot. Además, se introdujo el plásmido pQE30 con el gen tcdE_wt para su expresión y purificación en el vector Escherichia coli T7 lysY/I^q. La proteína TcdE obtenida fue unida a una matriz de sefarosa para los análisis de interacción entre TcdE y TcdB intracelular mediante ensayos de co-inmunoprecipitación. Resultados: TcdB fue detectada en los lisados bacterianos de los genotipos hipervirulentos, pero no así en las cepas de referencia control. La isoforma silvestre de TcdE fue posible expresarla en el vector correspondiente y así ser acopladas a un soporte de sefarosa. Al enfrentar los lisados de las cepas de C. difficile en estudio y una TcdB pura control se encontraron evidencias que sugieren que en las condiciones experimentales TcdB intracelular no co-inmunoprecipita con TcdE. Conclusiones: En la investigación se logró detectar la presencia de TcdB en lisados de dos cepas de genotipos hipervirulentos pero no así en una cepa de referencia, lo que confirma que estas cepas no solo hipersecretan toxinas sino que también las producen en mayor cantidad intracelular que las cepas de referencia. TcdB, en su conformación intracelular, parece tener una leve interacción proteica con la proteína asociada a la secreción TcdE. Además en este trabajo se logró el desarrollo de una metodología para evaluar estas interacciones, y ante que se han descrito otras isoformas de TcdE y distintos subtipos de TcdB sería recomendable ampliar el estudio de la relación estructural de ambas proteínas. Así contribuir a una mejor comprensión de los mecanismos asociados con el potencial patogénico de cepas hipervirulentas de C. difficile.

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Citas

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