Design and analytical validation of a duplex PCR for Ehrlichia and Rickettsia detection in ticks

Juan C. Pérez Pérez; Carolina Montoya Ruiz; Esteban Arroyave Sierra; Luis E. Paternina; Juan D. Rodas

doi:10.17533/udea.rccp.v31n4a05

Autores

Juan C. Pérez Pérez Universidade de Antioquia
Carolina Montoya Ruiz Universidade de Antioquia
Esteban Arroyave Sierra Universidade de Antioquia
Luis E. Paternina Universidade de Sucre
Juan D. Rodas Universidade de Antioquia

DOI:

https://doi.org/10.17533/udea.rccp.v31n4a05

Palavras-chave:

exclusividade, groEL, inclusividade, robustez, rRNA 23S

Resumo

Antecedentes: Ehrlichia e Rickettsia são dois dos principais gêneros de rickettsias transmitidos por carrapatos que infectam tanto animais selvagens quanto animais domésticos e até homens em todo o mundo. Objetivo: O objetivo principal foi elaborar e validar uma PCR duplex para Ehrlichia e Rickettsia em carrapatos. Métodos: A validação incluiu testes de sensibilidade, especificidade, reprodução e robustez. Para o PCR, utilizamos os genes groEl e 23Sr-RNA para Ehrlichia e Rickettsia, respectivamente. Resultados: O limite de detecção foi de 100 cópias de genes por 50 ml de reação para Erliquia spp e uma cópia de gene de Rickettsia por 50 ml de reação. Em geral, os iniciadores dos testes amplificaram em modelos computacionais os agentes bacterianos para os quais eles foram projetados, exceto os primers de Rickettsia que também amplificou Methylocystis sp. Os testes foram reproduzíveis (precisão intermediária) 96,7% para ambos os agentes e foram também robustos para tolerar mudanças de concentração em todos os reagentes, exceto o reagente Taq DNA polymerase. Conclusões: Os resultados da validação indicaram que o PCR é útil para detecção em ambos os gêneros bacterianos, portanto, um bom exame para validação diagnóstica.

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Biografia do Autor

Juan C. Pérez Pérez, Universidade de Antioquia

Myb., Linha de Zoonoses Emergentes e Reemergentes, Grupo de Pesquisa em Ciências Veterinárias (Centauro), Universidade de Antioquia, Medellín, Colômbia.

Carolina Montoya Ruiz, Universidade de Antioquia

Ing. Blga., Linha de Zoonoses Emergentes e Reemergentes, Grupo de Pesquisa em Ciências Veterinárias (Centauro), Universidade de Antioquia, Medellín, Colômbia.

Esteban Arroyave Sierra, Universidade de Antioquia

Ing. Agp., MSc., Linha de Zoonoses Emergentes e Reemergentes, Grupo de Pesquisa em Ciências Veterinárias (Centauro), Universidade de Antioquia, Medellín, Colômbia.

Luis E. Paternina, Universidade de Sucre

Blgo., MSc., PhD., Grupo de Pesquisa Biomédica, Universidade de Sucre, Sincelejo, Colômbia.

Juan D. Rodas, Universidade de Antioquia

MV, MSc, PhD., Linha de Zoonoses Emergentes e Reemergentes, Grupo de Pesquisa em Ciências Veterinárias (Centauro), Universidade de Antioquia, Medellín, Colômbia.

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