Evaluación del efecto de la remoción de la zona pelúcida de los oocitos sobre el desarrollo de embriones murinos obtenidos por fertilización in vitro

Abstract

Resumen

Con el objetivo de evaluar el efecto de la remoción de la zona pelúcida de  oocitos sobre el desarrollo embrionario murino in vitro, y el potencial uso de este procedimiento en programas de reproducción asistida  humana, se superovularon 84 ratonas.  A los oocitos obtenidos se les removió la zona pelúcida mediante el uso de una solución de pH 2, posteriormente  inseminados con diferentes concentraciones de espermatozoides; los embriones obtenidos cultivados in vitro hasta estadios preimplantatorios fueron transferidos a hembras pseudogestantes. Luego del tratamiento con la solución ácida se recuperaron 56% de los oocitos  con una viabilidad del 83.6%,   los oocitos fueron fertilizados normalmente en proporciones dependientes de la concentración de espermatozoides utilizada variando desde 25 hasta 66.6%,  estos se desarrollaron hasta estadios preimplantatorios en un 45%, siendo esta proporción inferior comparada con los controles. No se obtuvieron gestaciones de los embriones transferidos. Se demuestra que la remoción de la zona pelúcida es una técnica sencilla y viable, cuya única condición es la rapidez en su realización; es necesario usar bajas concentraciones de espermatozoides para incrementar la  proporción de fertilizaciones normales. Se confirman resultados de otros autores sobre la factibilidad de obtener embriones mediante la remoción de la zona pelúcida, aún en el humano. Queda por establecer el mínimo de espermatozoides necesarios para obtener la mayor proporción de fertilizaciones normales y explicar las razones del bajo desarrollo de los embriones obtenidos.

Palabras clave: desarrollo, manipulación, óvulos, ratones.

Summary

Evaluation of the effect of zona pellucida removal over the development of murine embryos obtained using in vitro fertilization. With the aim of evaluate the effect of zona pellucida removal over the development of murine embryos in  vitro and the potential use of these technique in human assisted reproduction programs, 84 mice females were superovulated. The zona pellucida was removed using an acidic solution pH 2, fertilized with different sperm concentrations and the embryos obtained were cultured to preimplantatory stages before to be transferred to pseudpregnant females. 56% of the manipulated oocytes were recovered after the acidic treatment with a viability of 83.6%, normal fertilization were obtained in a range from 25 to 66.6 % with dependency of the sperm concentration and 45% of them reach preimplantatory stages; this value is lower than the controls. No pregnancies resulted from the transfer of the embryos. The results obtained demonstrated the feasibility of the technique, but it still needs to be speed up in the manipulation procedure; it is necessary to use low sperm concentrations to obtain normal fertilization. Our results agree with others about the feasibility to obtain preimplantatory embryos after zona pellucida removal in humans and mice. It is necessary to determine the minimum number of sperm needed to maximize normal fertilization and investigate the reason of low development rates of the embryos obtained.

Key words:  development, manipulation, mice, oocytes.