Obtención, cultivo y caracterización de células de Schwann: un modelo de terapia celular

Autores/as

  • Zayra Garavito Instituto Nacional de Salud
  • Constanza Martínez Instituto Nacional de Salud
  • Diany Calderón Universidad El Bosque
  • Sonia Rahirant Instituto Nacional de Salud
  • María L. Caldas Instituto Nacional de Salud
  • Clara Spinel Universidad Nacional de Colombia
  • Hernán Hurtado Instituto Nacional de Salud

Resumen


Numerosos estudios han demostrado que las células de Schwann son importantes para la regeneración del sistema nervioso. Esta célula produce una serie de moléculas que favorecen el crecimiento de las fibras nerviosas. Estas moléculas pueden ser solubles como el NGF (Factor de crecimiento Nervioso), el LIF (Factor Inhibidor de la Leucemia), el BDNF (factor de crecimiento derivado del cerebro) y otros factores de crecimiento o moléculas asociadas con la adhesión celular como N-CAM (Molécula de Adhesión Neuronal), L1 y a la matriz extracelular, especialmente a la lámina basal como el complejo proteoglicano-laminina. Estas características han permitido a los investigadores utilizar estas células para estimular la regeneración, tanto del sistema nervioso central (SNC) como del sistema nervioso periférico (SNP).

Dentro de la línea de investigación de regeneración y del sistema nervioso del Laboratorio de Neurociencias del Instituto Nacional de Salud, se han obtenido, cultivado y caracterizado células de Schwann de ratón, rata y humano adultos, con el fin de desarrollar prótesis celulares que podrían soportar la regeneración. En este trabajo se muestran resultados obtenidos en el proceso de obtención, cultivo y caracterización de estas células.

La obtención, el cultivo y la caracterización se han realizado por diferentes metodologías. Para la obtención, hemos usado y estandarizado el cultivo a partir de dos fuentes de células, nervio periférico y ganglio tanto sensorial en el caso de ratón, como autonómico en el caso de células humanas. Estas técnicas nos han permitido obtener cultivos altamente enriquecidos en células de Schwann que en ratón alcanzan el 90%, en rata el 85% y en humano entre el 70-85%, determinados tanto por parámetros morfológicos como inmunocitoquímicos. Estos parámetros inmunocitoquímicos incluyen la evaluación para marcadores tales como la proteína S-100 y GFAP (Proteína Glial Fibrilar Acida). Adicionalmente, se realizó la evaluación inmunocitoquímica para bromodeoxiuridina (BrdU) incorporada por células en su fase S, la cual nos permite obtener una aproximación del comportamiento proliferativo de los diferentes fenotipos celulares presentes en nuestros cultivos. Al realizar la cuantificación para la inmunodetección de BrdU incorporada, se encontró un índice de marcaje del 60 % en ratón, del 80% en rata y del 20 % en células humanas, relativo a la población de células de Schwann totales. Otro parámetro de caracterización ha sido la morfología, la cual se ha evaluado en cultivo por contraste de fase, en la que se puede observar la refringencia y la formación de estructuras a manera de rosarios, típicas de las células de Schwann en cultivo, en material fijado por microscopía de luz en donde se evidencia la inmunoreactividad para los diferentes marcadores y ultraestructuralmente por microscopía electrónica, en donde se han podido observar inclusiones de mielina, abundantes ribosomas libres, estructuras de endocitosis y retículo endoplásmico dilatado al parecer propio en cultivo entre otros detalles.

Así, las células de rata ya han sido utilizadas en implantes autólogos, en modelos de regeneración en nervio dentario y en nervio ciático crónicamente denervado. En el caso del nervio dentario en el que se aprovechó el canal intraoseo por el que se conduce el nervio a través de la mandíbula, para que funcionara como una cámara de regeneración. En el caso del nervio ciático se utilizaron cámaras en las que se implantaron las células. En ambos casos el efecto de las células en la regeneración nerviosa está siendo actualmente evaluado.

Este trabajo de caracterización conducirá a la construcción “in vitro” de una prótesis celular con parámetros definidos, la que permitirá tener una mejor aproximación al comportamiento y aplicación de este tipo de injertos “in vivo” dentro de la naciente Ingeniería de tejidos.

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Biografía del autor/a

Zayra Garavito, Instituto Nacional de Salud

Asistente de Investigación. Laboratorio de Neurociencias

Constanza Martínez, Instituto Nacional de Salud

Rural. Laboratorio de Neurociencias

Diany Calderón, Universidad El Bosque

Interno en Investigación - Universidad El Bosque

Sonia Rahirant, Instituto Nacional de Salud

Tesista de Pregrado. Laboratorio de Neurociencias - INS

María L. Caldas, Instituto Nacional de Salud

Coordinador Unidad de Microscopia y Análisis de Imagen - INS

Clara Spinel, Universidad Nacional de Colombia

Profesor Asociado. Departamento de Biología - Universidad Nacional

Hernán Hurtado, Instituto Nacional de Salud

Coordinador Laboratorio de Neurociencias - INS

Publicado

2000-02-25

Cómo citar

1.
Garavito Z, Martínez C, Calderón D, Rahirant S, Caldas ML, Spinel C, Hurtado H. Obtención, cultivo y caracterización de células de Schwann: un modelo de terapia celular. Iatreia [Internet]. 25 de febrero de 2000 [citado 28 de junio de 2022];13(2):pág. 95. Disponible en: https://revistas.udea.edu.co/index.php/iatreia/article/view/3743

Número

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