Papel de las moléculas de adhesión ICAM-1 Y LFA-1 en la patogénesis de la Paracoccidioidomicosis pulmonar experimental

Resumen

Introducción: La Paracoccidioidomicosis (PCM), micosis sistémica común en América Latina, es una enfermedad crónica progresiva, causada por la inhalación de las conidias del hongo dimórfico térmico Paracoccidiodes brasiliensis (Pb). La infección pulmonar inicial se caracteriza por una importante respuesta inflamatoria aguda, posteriormente se observa una respuesta inflamatoria crónica y finalmente se desencadena un proceso fibrótico, secuela que se presenta en el 60 - 80 % de los pacientes. El proceso de adhesión de los leucocitos al endotelio se considera un evento temprano y es requisito indispensable para que se produzca la respuesta inflamatoria. Este proceso de adherencia es mediado por moléculas de adhesión como la molécula de adhesión intercelular-1 (ICAM-1) presente en el endotelio que se une a una b-2 integrina presente en el leucocito (LFA-1). Dichas moléculas no solo son necesarias para la adhesión de los leucocitos sino también, para su migración y activación. Su importancia ha sido demostrada en otras micosis como la candidiasis, criptococosis, aspergilosis y pneumocistosis. El objetivo del presente estudio es evaluar la expresión a nivel pulmonar de ICAM-1 y LFA-1 en un modelo murino de PCM experimental, establecer su relación con la respuesta inflamatoria observada y determinar el papel que jugarían estas moléculas en la patogénesis de la micosis.

Metodología: se utilizan ratones machos isogénicos BALB/c de 6 semanas de edad, los cuales son inoculados intranasalmente (i.n.) con 4 x 106 conidias de P. brasiliensis, cepa ATCC 60855 o con PBS (grupo control). Para determinar la respuesta inflamatoria y la expresión de ICAM-1 y LFA-1 a nivel pulmonar los animales son sacrificados a los 0, 1, 2, 3, 4, 7, 14 y 28 días post-infección para estudiar en ellos:

a) La celularidad del lavado broncoalveolar (LBA) (# total de células/animal y % de cada tipo celular) y b) la detección por inmunohistoquímica de la expresión de ICAM-1 y LFA-1 en los pulmones de ambos grupos de animales. Para evaluar el papel in vivo del ICAM-1 y LFA-1 en el control de la infección los animales infectados y no infectados serán tratados con anticuerpos monoclonales anti-ICAM-1 y anti-LFA-1. Se registrará diariamente el numero de muertes de cada grupo, por un periodo de cuatro meses y se determinará la diseminación extrapulmonar del hongo mediante el cultivo de órganos (hígado,

bazo y pulmón).

Resultados: se obtuvieron un total de 112 LBA distribuidos en 8 grupos con 14 muestras cada uno (8 infectados y 6 controles). El grupo control presento una baja celularidad (0.13 ± 0.032 x 106 células) sin existir diferencia significativa entre los diferentes periodos estudiados. Estos LBA presentaron un alto porcentaje de macrófagos ( 97.0 ± 5.4 %) con escasos PMN (2.4 ± 5.4 %). Por el contrario, los LBA provenientes de animales infectados presentaron un aumento significativo en su celularidad (1.4 ± 1.5 x 106 cels, p= 0.0019) siendo mayor este incremento en las primeras horas ( de 24hs= 1.12 ± 0.19 x 106 cels a 96hs= 2.07 ± 0.19 x 106 cels) con un pico máximo significativo a las 48hs (4.81 ± 0.86 x 106, p= 0.0001 ), mostrando un predominio de PMN (92.5 ± 2.0% y 90.7 ± 3.0 %) en las primeras 24 y 48hs respectivamente. Estos resultados confirman que la infección por vía inhalatoria con conidias de Pb induce un respuesta inflamatoria aguda inicial en pulmón con un reclutamiento de leucocitos y con predominio de PMN. Estos datos se correlacionarán posteriormente con la expresión a nivel pulmonar de las moléculas de adhesión ICAM-1 y LFA-1.