Caracterización de las Regiones Organizadoras Nucleolares coloreadas con Plata (AgNORs) en tumores cutáneos caninos

  • Gloria E. Giraldo
  • Diego Aranzazu
  • Bernardo J. Rodriguez
  • Mónica M. Pérez
  • María C. Ramírez

Abstract

Resumen Se utiliza una técnica de coloración con plata para visualizar las Regiones Organizadoras Nucleolares (AgNORs). La evaluación cuantitativa y cualitativa de estas regiones representa en la actualidad un marcador de actividad proliferativa en células tumorales. El presente estudio tuvo como objetivo caracterizar las AgNORs en algunos tipos de tumores cutáneos caninos, para lo cual se evaluaron 28 mastocitomas, 18 carcinomas espinocelulares y siete epiteliomas basocelulares, procedentes del archivo de Patología Animal y del Consultorio Veterinario de la Universidad de Antioquia, y de otros consultorios de la ciudad de Medellín, Colombia. Las muestras bloqueadas en parafina se cortaron a cuatro micras, y se colorearon con Hematoxilina-Eosina y Giemsa para diagnosticar y clasificar los mastocitomas. Se utilizó otra serie de cortes coloreados con plata para evaluar morfométricamente las AgNORs utilizando un Sistema Automático Analizador de Imágenes (SAAI). Se evaluaron los parámetros: área nuclear, área AgNORs/célula, número de AgNORs/ célula, y distribución AgNORs en la célula. Para determinar el número de células a evaluar se utilizó el estudio de variación de la inestabilidad de los valores medios, con relación al tamaño de la muestra; se obtuvo un mínimo representativo de 20 células por caso para los mastocitomas y los carcinomas espinocelulares, y de 30 células por caso, para los tumores basocelulares. Los datos fueron analizados estadísticamente mediante el análisis de varianza (ANOVA) y se compararon las medias por el test de Fischer (F) empleando un nivel de significancia de p< 0.05.  La coloración AgNORs fue factible en los tumores evaluados para lo cual se necesitaron de 30 minutos en el período de incubación. El análisis estadístico mostró que los mastocitomas grado II poseen un área nuclear menor estadísticamente significativa (p< 0.05). Existe además, diferencia estadística significativa (p< 0.05) en el número y en el área de las AgNORs entre los tres grados histopatológicos de este tumor. La coloración de AgNORs reveló dos poblaciones celulares en los mastocitomas, que difieren con la clasificación gradativa utilizada en la actualidad. Palabras clave: basocelular, espinocelular, marcador tumoral, mastocitoma, neoplasia. Summary A silver stain technique is used to identify the Nucleolar Organizer Regions (AgNORs). Nowadays, the quantitative and qualitative evaluation of these regions is a marker to the proliferative activity in tumor cells. The purpose of this study was to characterize AgNORs in some kind of canine skin tumors. There were evaluated 28 mast cells tumors, 18 squamous cells tumors and seven basal cells tumors from the animal pathology archive and from the veterinarian clinic of the University of Antioquia as well as other locals clinic in the city of Medellín, Colombia. The samples were embedded in paraffin and cutted to four microns and stained with Hematoxylin-Eosin to check the diagnostic and Giemsa stained to classify the mast cells tumors. To evaluate morphometrically the AgNORs in the automatic image analyzer (AIA) other series of these samples were stained with silver nitrate. The following parameters were evaluated: nuclear area, AgNORs area/cell, AgNORs number/cell, and AgNORs distribution in the cell. The study of the variation from the innestability of the average values was used in direct relation with sample size in order to determinate the number of cells to be evaluated; yielding a total of 20 cells in each case for the mast cell tumors and for the squamous cell tumors, moreover a total of 30 cells in each case for the basal cell tumors. The data was statistically anallyzed using the variance analysis and by comparing the medians by the Fischer (F) test, revealing significant level of p< 0.05 value. The AgNORs stain is viable in the evaluated tumors for what 30 minutes were needed for the incubation period. The statistical significant analysis (p< 0.05) shows that the grade II mast cell tumors have a smaller nuclear area. Furthermore it shows significant difference (p>0.05) in the number and the area of the AgNORs between the three histopathological levels of this tumor. The stained AgNORs revealed two cellular layers in the mast cell tumors that differ from the grade classification that is used today. Key words: basal cell tumor, mast cell tumor, neoplasia, squamous cell carcinoma, tumoral marker.

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Published
2016-07-18
Section
Original research articles