Análisis comparativo de amplificación de marcadores genéticos STR’s y SNP’s en muestras óseas

Abstract

Introducción la amplificación de marcadores genéticos tipo STR's a partir de restos óseos, está condicionada a la calidad y cantidad del ADN, uno de los principales problemas es la degradación de la molécula, que se ve reflejada en fragmentos muy cortos que impiden la unión de los primer a las secuencias específicas de ADN, dando como resultado ausencia de amplificación o perfiles genéticos deficientes. Con los actuales desarrollos de la tecnología, se han diseñado nuevos marcadores genéticos, como los SNP's, que permiten obtener perfiles genéticos a partir de muestras que tienen cantidades trazas de ADN y/o que está degradado, lo que se ha reflejado en la tipificación exitosa de muestras difíciles como los restos óseos.  

Objetivos Tipificar y analizar muestras de restos óseos con SNP's, que previamente, no amplificaron con marcadores genéticos tipo STR's. Demostrar la capacidad de amplificación de los marcadores SNP's en muestras restos óseos que contienen ADN degradado y/o con muy poca cantidad.

Materiales y Métodos Se analizaron 10 muestras de 5 individuos diferentes. Se tomaron dos muestras por individuo: un fragmento de aproximadamente 10 cm. de fémur derecho y de fémur izquierdo. A todas las muestras se les realizó extracción de ADN por el método Fenol-Cloroformo. La amplificación de ADN con marcadores genéticos STR's, se realizó con los kits comerciales: Identifiler® (Applied Biosystems) y Power- Plex 16HS® (Promega), adicionalmente se realizaron amplificaciones con mini STR's: Minifiler® (Applied Biosystems) y PowerPlex S5® (Promega). La amplificación de ADN con marcadores genéticos SNP's autosómicos se realizó en el laboratorio del Instituto de Medicina Legal de la Universidad de Santiago de Compostela. La tipificación se realizó por electroforesis capilar en Analizador Genético AB 3130 (Applied Biosystems).