Estratégias de detección de trampas extracelulares de neutrófilos (NETs)

Autores/as

  • Ana María Trejos Ramírez Universidad de Antioquia
  • Lizet Pérez Universidad de Antioquia
  • Gabriel Vélez Universidad de Antioquia
  • Catalina Reyes Universidad de Antioquia
  • Yermis Rocha Universidad de Antioquia
  • Julián Arango Universidad de Antioquia
  • Andrés Arias Universidad de Antioquia
  • Juan Álvaro López Universidad de Antioquia

DOI:

https://doi.org/10.17533/udea.iatreia.15740

Resumen

INTRODUCCIÓN: la NETosis es un mecanismo celular, descrito recientemente, en el que los neutrófilos liberan una red de cromatina y proteínas granulares al espacio extracelular en respuesta a microorganismos y otras moléculas activadoras. Estas redes llamadas trampas extracelulares de Neutrófilos (NETs) son capaces de atrapar y destruir gérmenes. In vitro es posible inducir la formación de NETs usando estímulos como PMA (phorbol myristate acetate), LPS (lipopolisacarido), microorganismos y algunas citoquinas. Las NETs se visualizan por medio de microscopia de fluorescencia y se pueden cuantificar mediante espectrofluorimetría. 

MATERIALES Y MÉTODOS: 25 x104 neutrófilos aislados de sangre periférica son incubados por 30 minutos en RPMI a 37º C en 5% de CO2. Posteriormente se adiciona al medio PMA (25 nM) por un espacio de 90 minutos. Por último, se hace la tinción con intercalantes de DNA como sytox Green (2.5 μM), Ioduro de propidio (2.5 ug/ml) o Hoechst (10 μg/ml). Los platos de cultivo son leídos por espectrofluorimetría para cuantificar la cantidad de NETs y las placas son  observadas en microscopia de fluorescencia.

RESULTADOS PRELIMINARES Y CONCLUSIONES: hemos encontrado que al estimular los neutrófilos con PMA (25 nM), se observan estructuras compatibles con las NETs. Este proceso es dosis dependiente y se induce entre 60 y 120 minutos aproximadamente luego de adicionar el estímulo. Su visualización por microscopía de fluorescencia es posible mediante el uso de intercalantes de DNA como sytox Green, Ioduro de propidio y Hoechst. Hemos determinado que la cuantificación de NETs se puede llevar a cabo por espectrofluorimetría. El DNA presente en el espacio extracelular se une a Sytox Green y la emisión de fluorescencia se traduce en el porcentaje de NETs presentes.

|Resumen
= 5056 veces

Descargas

Los datos de descargas todavía no están disponibles.

Biografía del autor/a

Ana María Trejos Ramírez, Universidad de Antioquia


Estudiante de Microbiología y Bioanálisis
Grupo de investigación inmunodeficiencias primarias.
Universidad de Antioquia.

Lizet Pérez, Universidad de Antioquia


Escuela de Microbiología, Universidad de Antioquia.
Grupo de Investigación Inmunodeficiencias Primarias, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

Gabriel Vélez, Universidad de Antioquia


Grupo de Investigación Inmunodeficiencias Primarias, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

Catalina Reyes, Universidad de Antioquia


Grupo de Investigación Inmunodeficiencias Primarias, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

Yermis Rocha, Universidad de Antioquia


Grupo de Investigación Inmunodeficiencias Primarias, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

Julián Arango, Universidad de Antioquia

 

Escuela de Microbiología, Universidad de Antioquia.

Grupo de Investigación Inmunodeficiencias Primarias, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

Andrés Arias, Universidad de Antioquia

 

Escuela de Microbiología, Universidad de Antioquia.

Grupo de Investigación Inmunodeficiencias Primarias, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

Juan Álvaro López, Universidad de Antioquia

Grupo de Investigación Inmunodeficiencias Primarias, Facultad de Medicina, Universidad de Antioquia

Publicado

05-07-2013

Cómo citar

1.
Trejos Ramírez AM, Pérez L, Vélez G, Reyes C, Rocha Y, Arango J, Arias A, López J Álvaro. Estratégias de detección de trampas extracelulares de neutrófilos (NETs). Iatreia [Internet]. 5 de julio de 2013 [citado 26 de mayo de 2024];26(3-S):S-34. Disponible en: https://revistas.udea.edu.co/index.php/iatreia/article/view/15740

Número

Sección

Resúmenes

Artículos más leídos del mismo autor/a

Artículos similares

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 > >> 

También puede {advancedSearchLink} para este artículo.