Caracterización de dos proteínas metacíclicas de leishmania y su relación con la virulencia

Abstract

Los parásitos de Leishmania durante su crecimiento tanto in vivo como in vitro se diferencian desde un estado no infectivo o poco infectivo hasta uno más infectivo. Este proceso de diferenciación está acompañado de cambios en la expresión de algunas moléculas. Entre las moléculas mejor estudiadas que experimentan modificaciones tanto cualitativas como cuantitativas en la expresión, durante este proceso de diferenciación, se encuentra un glicoconjugado de superficie denominado Lipofosfoglicano (Turco y Descoteaux, 1992) y una glicoproteína de superficie con actividad proteasa, denominada gp63 (Kweider, et al.1987). Posteriormente, empleando técnicas de hibridización substractiva, se han identificado los genes, Meta-1 (Nourbakhsh, et al., 1996) y Mat-1 (Brodin et al., 1992) los cuales se expresan preferencialmente o exclusivamente en el promastigote metacíclico infectivo. Poco se conoce sobre la función de estos dos genes en el ciclo de vida de Leishmania. Experimentos de gene-knockout para tratar de elucidar un posible papel del gen Meta-1 mostraron que no puede ser reemplazado dado que los dobles mutantes no fueron viables, sugiriendo el papel esencial de esta proteína, en promastigotes. Sin embargo, sobreexpresión de la proteína Meta-1 en promastigotes de L. amazonensis generó parásitos mas virulentos que los parásitos silvestres (Uliana et al., 1999).

En este estudio se describe la caracterización molecular de estos dos genes metacíclicos en Leishmania infantum. Además, se evaluará el papel de la proteína Meta-1 en la virulencia de Leishmania empleando la técnica de RNA antisentido. Para esto se clonará en orientación reversa el ORF de meta-1 junto con el 3’ UTR, amplificados por PCR a partir de un clon cósmido aislado de una librería de DNA genómico de L. infantum. Esta técnica ha sido empleada en Leishmania para evaluar función génica con buenos resultados (Chen, et al., 2000).