Caracterización de leucemias agudas en adultos por citogenética convencional y FISH (hibridización in situ por fluorescencia)

Resumen

Introducción: En la actualidad se ha establecido el componente genético de numerosas neoplasias y en varias de ellas las alteraciones cromosómicas se reconocen como un elemento crítico en su patogénesis, modificando el funcionamiento de algunos oncogenes. En relación con las leucemias, las alteraciones citogenéticas que sirven como marcadores de las mismas, pueden presentarse tanto en el número como en la estructura cromosómica . Para detectar los cambios cromosómicos asociados con cáncer, las células afectadas deben ser analizadas por cariotipo, mediante técnicas convencionales de bandeo las cuales permiten, en la mayoría de los casos, identificar las alteraciones presentes. Sin embargo, en algunas situaciones donde no es posible identificar dichas alteraciones, es necesario emplear técnicas moleculares. La hibridizacion in situ por fluorescencia (FISH), técnica que combina la citogenética y la genética molecular, utiliza sondas de DNA marcadas con fluorocromos y sirve tanto para el estudio de alteraciones cromosómicas numéricas y estructurales, como para identificar los genes involucrados en ellas. En conclusión, el aporte más significativo de la citogenética lo constituye el haber demostrado alteraciones cromosómicas específicas en las neoplasias, las cuales son de gran utilidad para establecer un diagnóstico y un posible curso y pronóstico de la enfermedad.

Objetivo: Analizar las alteraciones cromosómicas encontradas en pacientes adultos con diagnóstico clínico de leucemia linfoide o mieloide aguda, utilizando técnicas de citogenética clásica y molecular (FISH). Población de estudio: se analizarán las muestras de médula ósea de aproximadamente 50 pacientes mayores de 15 años, atendidos en Hematología de adultos del HUSVP e ISS, con diagnóstico de Leucemias mieloide o linfoide aguda definidas por criterios clínicos y estudios hematológicos.

Estudio citogenético y FISH: se analizarán por citogenética convencional los cultivos de las muestras de médula ósea de dichos pacientes a las 24 horas, con bandeo G o R. Luego de obtener los resultados del cariotipo, se aplicará la técnica de Hibridización in situ por fluorescencia (FISH) a las mismas muestras, particularmente aquellas donde no se obtuvo o no fue posible definir el resultado por citogenética convencional. Se utilizarán para ello las sondas de DNA disponibles para algunos de los marcadores ya conocidos en dichas leucemias.

Resultados: Hasta el momento, se han procesado para cariotipo 22 muestras de médula ósea de los pacientes señalados: 3 con diagnóstico de leucemia linfoide aguda, 7 con leucemia mieloide aguda y 12 leucemias agudas aun sin clasificación FAB. En 17 de ellas ha sido posible obtener cromosomas y los resultados de cariotipo con bandeo G o R son los siguientes: Cariotipo con número cromosómico normal 3; Hipodiploidías (43-45 cromosomas)6; Monosomías 2 (doble monosomía del cromosoma 20, monosomía del cromosomas Y); Trisomías 2 (cromosoma 6 y 8?); Traslocaciones 2 (t(15;17)?), deleción del brazo largo del cromosoma 5 (del(5q21-35)) 1 y cariotipo 48,XYY, + 21: 1. Las traslocaciones (t15;17), así como la trisomía del cromosomas 8, están por confirmar con la técnica de FISH, la cual está en proceso de estandarización.

Discusión: las técnicas convencionales de citogenética han demostrado ser de gran ayuda en el diagnóstico de las alteraciones cromosómicas en las leucemias. La mayor dificultad radica en la obtención de un buen índice mitótico y de metafases de buena calidad que permitan aplicar las técnicas de bandas y así garantizar el reconocimiento de dichas alteraciones. Hasta ahora, las alteraciones citogenéticas observadas en este estudio coinciden con los informes de la literatura y pueden ubicarse igualmente dentro de los grupos de pronóstico de la enfermedad de acuerdo con dichos hallazgos.