Análisis de la localización, dinámica intracelular y producción de O2 - por el sistema NADPH oxidasa de las células fagocíticas
DOI:
https://doi.org/10.17533/udea.iatreia.3868Keywords:
NADPH OXIDASA, FP ENFERMEDAD GRANULOMATOSA CRÓNICAAbstract
El sistema NADPH oxidasa, un sistema encargado de producir
anión superóxido (O2 -) en las células fagocíticas, está formado por las proteínas: gp91 phox, p22 phox, p47 phox, p67 phox, p40 phox y la proteína Rac. Las células COS-7, una línea celular de riñón de simio, que expresa endógenamente Rac1, y que por transfección estable expresan gp91 phox, p47 phox y p22 phox, pueden ser cotransfectadas adicionalmente con vectores episomales pGFP-N3, pEGFP-C1 y pCDNA3.1zeo(+) que contengan el cDNA tipo silvestre y mutante de la proteína p67 phox obtenidos por mutagénesis sitio-dirigida. Estos vectores contienen el gen de la proteína verde fluorescente (GFP), útil para explorar la localización intracelular y la dinámica de los componentes del sistema oxidasa. Después de la cotransfección, se estimulan las células con PMA y se determina la producción de O2
- y la señal de fluorescencia generada por GFP de forma directa en células vivas por microscopía confocal.
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